O sequenciamento e a análise filogenética a partir da seqüência nucleotídica do gene que codifica a proteína VP2 foram realizados com o intuito de caracterizar os agentes causadores de dois surtos da doença infecciosa bursal em lotes de poedeiras do estado Minas Gerais, em 2004. Os resultados indicam que os surtos analisados podem estar relacionados com o vírus de origem vacinal.

Sequencing and phylogenetic analysis based on the nucleotide sequence of the gene encoding VP2 protein was carried out in order to characterize the agent of two outbreaks of infectious bursal disease in layer flocks in the state of Minas Gerais in 2004. The results indicate the outbreaks could be related to the vaccinal virus.

O herpesvírus bovino 5 (BoHV-5) é o agente da menigoencefalite herpética bovina. A doença neurológica, associada à infecção pelo BoHV-5, apresenta altas taxas de letalidade em bovinos jovens e está disseminada no Brasil. A prevenção das perdas causadas pela infecção pelo herpesvírus está baseada, principalmente, na imunização dos animais. Nesse sentido, foi delineada uma comparação entre isolados de BoHV-5, buscando selecionar o isolado mais antigênico para a formulação de vacinas. As formulações inativadas foram produzidas com os isolados ISO9898292, SV507, SV163, 1807 e EVI145 e administradas a cinco grupos de 10 ovelhas cada, que receberam duas doses vacinais por via intramuscular com intervalo de 21 dias. Foram realizadas coletas de sangue para análise de presença de anticorpos por soroneutralização e acompanhamento dos animais até o 63° dia após a primo-vacinação. Foram observados dois picos na curva de anticorpos, o primeiro no dia 14, após a vacinação, quando os títulos médios de anticorpos variaram entre 23,1 e 138,6. O segundo pico foi observado 14 dias após a revacinação, quando os títulos médios variaram entre 301,3 e 1017,5. No 42° dia após a revacinação, foi observada variação de título entre 82,4 e 305,9. A diferença entre as médias de títulos de anticorpos de cada grupo de animais sugere uma menor antigenicidade do isolado ISO9898292 em relação aos demais, demonstrando uma possível variação antigênica entre os isolados. Todos os isolados, com exceção do ISO9898292, mostraram-se imunogênicos para a indução de anticorpos.

Herpesvirus bovine 5 (BoHV-5) is the agent of bovine herpetic menigoencephalitis. The neurological disease associated with the infection is highly lethal in young cattle and it is widespread in Brazil. Control of the clinical signs caused by herpesviruses is based mainly on the immunization of cattle. A comparative study was performed among Brazilian BoHV-5 isolates to select the more antigenic virus. Inactivated vaccines were formulated using isolates ISO9898292, SV507, SV163, 1807 and EVI145 and administered to five groups of 10 sheep, each animal receiving two intramuscular doses with a 21 days interval. Blood collection for serology by virusneutralization were performed until the 63rd day after the first vaccination, two peaks in the curve of antibodies were observed, the first on day 14, ranged from 23.l to 138.6. The second peak was observed 14 days after the booster, and ranged from 301.3 to 1017.5. In the 42nd day after the booster, it was observed a titer variation from 82.4 to 305.9. The differences among antibody titers of each group of suggests a lower antigenicity of isolate ISO9898292 in comparison with the others, demonstrating a possible antigenic variation among the isolates. Thus, all isolates, with exception of ISO9898292, were immunogenic for the induction of neutralizing antibodies.

O circovírus suíno 2 (PCV2) é geralmente associado à síndrome da circovirose suína, que é considerada uma importante doença de suínos e possui um sério impacto econômico na suinocultura mundial. Este trabalho descreve a construção de um plasmídeo recombinante que expressa a proteína estrutural do PCV2 e a avaliação das respostas imune humoral e celular por meio de vacinação em camundongos BALB/c. O candidato vacinal foi submetido a análises in vivo, determinando a capacidade de induzir resposta imune específica em camundongos. O DNA de um isolado brasileiro de PCV2 foi extraído e o gene que codifica para a proteína do capsídeo foi amplificado por PCR e inserido num plasmídeo de expressão. Grupos de camundongos BALB/c foram inoculados por via intramuscular e intradérmica a cada 15 dias, com 100µg e 50µg da construção vacinal, respectivamente. Outro grupo foi inoculado com 100µg do plasmídeo original, correspondente ao grupo controle. A soroconversão e a resposta celular dos grupos de camundongos BALB/c vacinados foram comparados como parâmetros de avaliação vacinal. A soroconversão foi avaliada por um teste de ELISA. Após 3 imunizações, as células esplênicas dos animais imunizados foram utilizadas nos ensaios de linfoproliferação. A soroconversão para o PCV2 foi detectada por ELISA nos animais inoculados com a construção vacinal quando comparados com o grupo controle. Nos ensaios de linfoproliferação foi observada uma grande proliferação celular nos animais inoculados comparados ao grupo controle. Portanto, o candidato vacinal demonstrou ser capaz de induzir tanto uma resposta humoral e celular nos camundongos inoculados.

Porcine circovirus 2 (PCV2) is generally associated with the porcine circovirosis syndrome, which is considered an important disease of swine and has potentially serious economic impact on the swine industry worldwide. This article describes the construction of a recombinant plasmid expressing the PCV2 structural protein and the evaluation of cellular and humoral immune responses produced by this recombinant vaccine in BALB/c mice. The vaccine candidate was obtained and analyzed in vivo, in an effort to determine the ability to induce a specific immune response in mice. DNA was extracted from a Brazilian PCV2 isolate and the gene coding for Cap protein was amplified by PCR and inserted into an expression plasmid. Groups of BALB/c mice were inoculated intra-muscularly and intradermally in a 15-day interval, with 100 µg and 50 µg of the vaccine construct, respectively. Another group was inoculated intramuscularly with 100 µg of empty plasmid, corresponding to the control group. Seroconversion and cellular response in BALB/c mice were compared and used for vaccine evaluation. Seroconversion was analyzed by ELISA. After a series of 3 immunizations the spleen cells of the immunized animals were used to perform lymphocyte proliferation assays. Seroconversion to PCV2 was detected by ELISA in the animals inoculated with the vaccine construct when compared with control groups. Lymphocyte proliferation assays showed a stronger cell proliferation in the inoculated animals compared with the control group. Thus, the vaccine candidate construct demonstrated to be able to induce both humoral and cellular responses in inoculated mice.

A febre aftosa é uma das doenças mais temidas nos rebanhos em todo o mundo. A vacinação tem sido uma arma eficiente no controle da doença, no entanto há preocupações com as vacinas atualmente utilizadas incluindo a necessidade de instalações de alta segurança para a produção dessas vacinas e a falta de um teste de diagnóstico aprovado que faça distinção precisa entre animais vacinados dos infectados. Várias vacinas têm sido testadas contra a febre aftosa e uma dessas utiliza como vetor um vírus defectivo para replicação, derivado do adenovírus humano tipo 5 (Ad5), o qual contém as proteínas que compõe capsídeo do vírus da febre aftosa (P1-2A) e a protease 3C, protegeu completamente suínos contra o desafio de uma cepa homóloga (A12 e A24). Uma vacina com o Ad5-P1-2A+3C proveniente da cepa O1 Campos (Ad5-O1C), no entanto, somente induziu um baixo título de anticorpos neutralizantes específicos em testes de potência vacinal em suínos. O fator estimulante de colônias de granulócitos e macrófagos (GM-CSF) tem sido utilizado com sucesso na formulação de vacinas para estimular a resposta imune contra inúmeras doenças, incluindo HIV, Hepatite C e B. Na tentativa de melhorar a resposta imune específica contra a febre aftosa induzida pelo Ad5-O1C, suínos foram vacinados com Ad5-O1C juntamente com Ad5-GM-CSFporcino. Entretanto nas, condições utilizadas nesse teste, o GM-CSF suíno não melhorou a resposta imune do Ad5-O1C e adversamente afetou o nível de proteção de suínos desafiados com o vírus homólogo da febre aftosa.

Foot-and-mouth disease (FMD) is one of the most feared diseases of livestock worldwide. Vaccination has been a very effective weapon in controlling the disease, however a number of concerns with the current vaccine including the inability of approved diagnostic tests to reliably distinguish vaccinated from infected animals and the need for high containment facilities for vaccine production, have limited its use during outbreaks in countries previously free of the disease. A number of FMD vaccine candidates have been tested and a replication-defective human adenovirus type 5 (Ad5) vector containing the FMDV capsid (P1-2A) and 3C protease coding regions has been shown to completely protect pigs against challenge with the homologous virus (FMDV A12 and A24). An Ad5-P1-2A+3C vaccine for FMDV O1 Campos (Ad5-O1C), however, only induced a low FMDV-specific neutralizing antibody response in swine potency tests. Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) has been successfully used to stimulate the immune response in vaccine formulations against a number of diseases, including HIV, hepatitis C and B. To attempt to improve the FMDV-specific immune response induced by Ad5-O1C, we inoculated swine with Ad5-O1C and an Ad5 vector containing the gene for porcine GM-CSF (pGM-CSF). However, in the conditions used in this trial, pGM-CSF did not improve the immune response to Ad5-O1C and adversely affected the level of protection of swine challenged with homologous FMDV.

O Vírus Respiratório Sincicial Bovino (BRSV) tem sido raramente identificado como agente etiológico de doença respiratória em bovinos no Brasil. Isso contrasta com freqüentes relatos clínicos e histopatológicos sugestivos de enfermidade associada ao BRSV. Com o objetivo de investigar o possível envolvimento do BRSV em casos de pneumonia em bovinos jovens, realizou-se uma pesquisa retrospectiva para antígenos do BRSV em cortes histológicos de materiais submetidos a quatro serviços de diagnóstico nos Estados do Rio Grande do Sul e Minas Gerais. Dez entre 41 casos examinados (24,4%) foram positivos para antígenos do BRSV por imunohistoquímica (IPX). Oito desses casos (19,5%) também foram positivos por imunofluorescência (IFA) e 31 casos (75,6%) foram negativos em ambos os testes. Nos pulmões, antígenos virais foram detectados predominantemente nas células epiteliais dos bronquíolos e menos freqüentemente nos alveólos. Em um caso, antígenos virais foram detectados exclusivamente no epitélio alveolar. A presença de células positivas restringiu-se ao epitélio dessas vias aéreas. Em dois casos, antígenos virais foram detectados em células descamativas e em restos celulares no exsudato das vias aéreas. Os casos positivos para antígenos do BRSV eram oriundos principalmente de animais jovens (2 a 12 meses de idade) de rebanhos leiteiros. As principais alterações histológicas observadas foram pneumonia bronco-intersticial caracterizada por espessamento dos septos alveolares adjacentes às vias aéreas, infiltrados de células mononucleares e presença de células gigantes multinucleadas nos alveólos. Os resultados obtidos demonstram a utilidade dos métodos de detecção de antígenos em cortes histológicos para o diagnóstico da infecção pelo BRSV. Além disso, esses resultados confirmam evidências anteriores sobre a importância do BRSV como patógeno respiratório no sudeste e sul do Brasil.

Bovine respiratory syncytial virus (BRSV) has been only sporadically identified as a causative agent of respiratory disease in Brazil. This contrasts with frequent reports of clinical and histopathological findings suggestive of BRSV-associated disease. In order to examine a possible involvement of BRSV in cases of calf pneumonia, a retrospective search was performed for BRSV antigens in histological specimens submitted to veterinary diagnostic services from the states of Rio Grande do Sul and Minas Gerais. Ten out of 41 cases examined (24.4%) were positive for BRSV antigens by immunohistochemistry (IPX). Eight of these cases (19.5%) were also positive by indirect immunofluorescence (IFA), and 31 cases (75.6%) were negative in both assays. In the lungs, BRSV antigens were predominantly observed in epithelial cells of bronchioles and less frequently found in alveoli. In one case, antigens were detected only in the epithelium of the alveolar septae. The presence of antigen-positive cells was largely restricted to epithelial cells of these airways. In two cases, positive staining was also observed in cells and cellular debris in the exudate within the pulmonary airways. The clinical cases positive for BRSV antigens were observed mainly in young animals (2 to 12 month-old) from dairy herds. The main microscopic changes included bronchointerstitial pneumonia characterized by thickening of alveolar septae adjacent to airways by mononuclear cell infiltrates, and the presence of alveolar syncytial giant cells. In summary, the results demonstrate the suitability of the immunodetection of viral antigens in routinely fixed tissue specimens as a diagnostic tool for BRSV infection. Moreover, the findings provide further evidence of the importance of BRSV as a respiratory pathogen of young cattle in southeastern and southern Brazil.

Com objetivo de determinar a eficiência da transferência da imunidade passiva e a relação com morbidade e ganho médio de peso diário (GMD) em condições e regionais, foram utilizadas amostras de soro de 87 fêmeas da raça holandesa e de suas respectivas terneiras, mantidas em uma propriedade da região central do estado do Rio Grande do Sul. Nas vacas, o nível de imunoglobulinas (Igs) séricas foi determinado pela técnica de turvação pelo sulfato de zinco, 28 dias antes do parto e, nas terneiras, às 24 horas de vida, após fornecimento de colostro ad libitum desde o nascimento. A média de imunoglobulinas séricas foi de 24,22 e 11,40g/l, nas vacas e terneiras respectivamente. Os níveis séricos de imunoglobulinas das terneiras demonstraram baixa correlação (R=0,14) com os níveis de suas genitoras. Das 87 terneiras, 14 (16,10%) apresentaram níveis de Igs inferiores a um desvio padrão abaixo da média (4,59g/l) e foram consideradas com falha de transferência de imunidade passiva (FTP). No período do nascimento até o desmame, foi observada maior ocorrência de diarréia no grupo de animais com FTP (100%) comparado aos demais com aporte normal de Igs (90,7%), porém a diferença não foi significativa entre os grupos. A prevalência de sinais clínicos de doenças respiratórias também foi semelhante nos dois grupos (35,70% e 36,90% respectivamente). Ao analisar-se o GMD do nascimento até os 13-16 meses de idade entre os grupos, observou-se que os animais com FTP apresentaram esse índice menor que os demais (P<0,05), o que não pode ser observado no período do nascimento até o desmame. Os resultados demonstram a importância da imunidade passiva em bovinos, além disso, fornecem parâmetros regionais para sua avaliação.

Serum samples from 87 calves from a dairy herd in Southern Brazil were collected to determine the levels of passive transfer and its relationship to morbidity and mean daily weight gain (MDG). Serum immunoglobulin (Ig) levels were measured by the zinc sulfate turbidity test at 24 hours of age in the calves. The average serum Ig level was 11.40g/l. Fourteen out of 87 calves (16.1%) showed serum Ig levels one standard deviation below the mean (4.59g/l) and were considered as having failure of passive immunity transfer (FPT). The occurrence of diarrhea from birth to weaning was higher in the FPT group (100%) than the normal group (90.7%) but the difference was not significant. The occurrence of signs of respiratory disease was similar in both groups (35.7% for FPT and 36.9% for the normal group). The mean daily gain from birth to 13-16 months of age in the FPT group was significantly (P>0.05) lower than in the group with normal serum Ig levels. The difference in MDG from birth to weaning between the groups was not significant. These results demonstrate the importance of passive immunity in cattle, and also provide regional parameters for the evaluation of FPT in cattle.

Determinou-se a quantidade de imunoglobulinas(Igs) séricas em 1.530 amostras coletadas de 81 vacas, no período de 28 dias pré e pós-parto (n=579), e suas terneiras, no período até 210 dias (n=951) pela técnica de turvação pelo sulfato de zinco. Os níveis de imunoglobulinas das vacas demonstraram queda nas duas semanas pré-parto, indicando uma transferência de Igs da corrente circulatdria para a glândula mamária. A média de imunoglobulinas séricas às 24 horas de vida em 76 terneiras foi de 11,66mg/ml (desvio padrão de 7,4). Foram considerados como animais com falha da transferência da imunidade passiva (FPT) aqueles que apresentaram niveis inferiores a um desvio padrão abaixo da média (4,2mg/ml). 0s animais com FPT demonstraram diferença no comportamento da evolução das imunoglobulinas séricas até os 56 dias de idade comparado com os dernais. Ao comparar-se diferentes métodos de quantificão de imunoglobulinas observou-se alta (r=0.91) associação entre a técnica de turvação e eletroforese associada às proteínas totais séricas e baixa eficiência das técnicas de precipitação por sulfito de sódio e coagulação por glutaraldeído.

The zinc sulfate turbidity test (ZST) was used to determine the immunoglobulin concentration in 1.530 serum samples collected from 81 cows (28 days before parturition to 28 days after parturition - n=579). Heifers born from these cows were also tested untd 210 days of live (n=951) with the same test Levels of Igs in cows decreased during the two weeks prepartum, indicating a transfer of circulating Igs to the mammary gland. The average serum Igs at 24 hours after birth in 76 female calves was 11.66 mg/ml with a standart deviation (SD) of 7 4. Failure of passive transfer (FPT) was considered to occur m animals with levels of lgs lower than one SD below average (4.2 mg/ml). FPT animals had lower levels of serum Igs than the other group unlil 56 days of age. High correlation (r=O.91) between ZST and serum electrophoresis was observed Sodium sulfite precipitation and glutaraldehyde coagulation tests were less efficient than ZST.

Determinou-se a evolução da imunidade colostral contra o herpesvírus bovino tipo 1 (BHV-1) através de análise de amostras de soro de terneiras coletadas às 6, 12 e 24 horas após o nascimento, semanalmente dos 7 dias até os 63 dias de idade, e mensalmente até 180 dias. O estudo foi realizado através do teste de soro-neutralização (SN). Os anticorpos colostrais declinaram progressivamente. Amostras negativas começaram a aparecer no 28° dia após o nascimento, e aos 180 dias de idade foi estimado que o título médio geométrico de anticorpos (GMT) era £1:2. Sugere-se que para diagnóstico de infecção pelo BHV-1 a prova de SN seja realizada após o 6° mês de idade.

The aim of the present study was to determine the evolution of the levels of anti-BHV-1 colostral antibodies. Serum samples were obtained at 6, 12 and 24 hours post-birth, weekly through the 63rd day of age, and monthly through the 180rd day. The study utilized the serum neutralization test (SN). The colostral antibodies against BHV-1 declined gradually: the first negativo samples were obseved at day 28, and the geometric mean titer of antibodies (GMT) was estimated to be £1:2 at day 180. These data suggest that serology for BHV-1 (using the SN) should be used only in calves older then six months.

O vírus da Leucose Enzoótica Bovina (VLB) causa uma infecção persistente em bovinos, sendo responsável por perdas econômicas significativas para a pecuária bovina. O objetivo deste estudo foi determinar a prevalência da infecção pelo VLB no rebanho leiteiro do Estado do Rio Grande do Sul, Brasil e estudar alguns aspectos epidemiológicos da infecção. Um total de 39.799 amostras de soro. coletadas em 4.200 propriedades de 172 municípios, distribuídos em 9 regiões geográficas, foram testadas pela técnica de imunodifusão em gel de ágar (IDGA), com antígeno glicoprotéico (glicoproteína gp 51). Os exames sorológicos revelaram 3.645 (9,2%) amostras positivas. No entanto, a prevalência média do Estado, quando foi considerada aproximadamente 1% da população em cada região, foi de 12,0% (1.295/10.357) e 29,1% (385/1.321) das propriedades apresentaram pelo menos um animal positivo. A prevalência da infecção variou de 2,2% (17,8% das propriedades) em Uruguaiana, a 19,6% (57,8% das propriedades) em São Gabriel. Foram observadas taxas de 15,5% (41.8% das propriedades) na grande Porto Alegre; 9,9% (64,4%) em Pelotas: 19,4% (42,9%) em Bagé; 9,2% (36,2%) na grande Santa Rosa; 12.9% (37,8%) em Erexim; 7,1% (26,5%) em Passo Fundo e 8,0% (33,8%) em Santa Maria. Esses resultados demonstram que a infecção pelo VLB esta amplamente distribuída no rebanho leiteiro do Estado. No entanto, os índices de infecção são relativamente baixos se comparados com índices de outros estados e países e são compatíveis com programas de controle e erradicação.

Bovine leukosis vírus (BLV) is associated with a persistem infection in cattle that is responsible for serious lasses to the livestock industry. The objective of this study was to determine the prevalence and to analyse some epidemiological aspects of the BLV infection in the dairy herd of the Rio Grande do Sul state. A total of 39.799 blood samples, collected in 4,200 herds from 172 counties, distributed in 9 geographic regions, were tested by the agar-gel immunodiffusion test (AGID) with glycoproteic antigen (glycoprotein gp 51). The sorologic tests showed 3,645 (9.2%) positive; however, the prevalence in the state, when considered about 1% of the population in each region was only, 12.0% (1,295/10,357) and 29.1% (385/1,321) of the herds had at least one seropositive animal. The prevalence ranged from 2.2% (17.8% of the herds) in Uruguaiana to l9.6% (57.85% of the herds) in São Gabriel. Prevalences of 15.5% (41.8% of herds) in the Porto Alegre metropolitan area. 9.9% (64.4%) in Pelotas, 19.4% (42.9%) in Bagé, 9.2% (36.2%) in Santa Rosa, 12.9% (37.8%) in Erexim, 7.1% (26.5%) in Passo Fundo and 8% (33.8%) in Santa Maria were observed. These results show that the BLV infection is widely spread within the Rio Grande do Sul dairy herd. Nevertheless, the overall prevalence is still low if compared to other states and countries and may be compatible with control and eradication efforts.

Soros de 7956 bovinos leiteiros foram testados pela técnica de soro-neutralização para determinar a prevalência de anticorpos contra o Herpesvírus Bovino Tipo 1 (HVB 1). As amostras provinham de 99 municípios do Estado do Rio Grande do Sul. Os municípios foram agrupados em nove bacias leiteiras conforme critérios da Cooperativa Central Gaúcha de Leite (CCGL). A prevalência de anticorpos encontrada foi de 18,8%. Dos 99 municípios testados 91 (91,9%) apresentaram pelo menos um animal positivo e 8 (8,1%) foram negativos. A maioria das bacias leiteiras apresentou uma prevalência semelhante à demonstrada pelo restante do Estado. A bacia 7, região de Passo Fundo apresentou a mais baixa prevalência (12%) e a bacia 9, região de Quaraí, a mais alta (49,5%). As amostras foram divididas em quatro grupos etários: animais até 2 anos, 2 a 4, 4 a 6 e maior que 6 anos. Observou-se que a prevalência aumentou com a idade, com a maior diferença verificada entre o primeiro e o segundo grupo e que a infecção ocorre com maior frequência em animais com mais de 2 anos. Não foi verificada diferença significativa entre título de anticorpos e idade dos animais. A grande relevância dos resultados está na prevalência comprovada de 54,5 % de propriedades positivas representando 371 de um total de 685 testadas no Estado. Levando-se em consideração os resultados deste inquérito pode-se afirmar que o Herpesvírus Bovino Tipo 1 encontra-se disseminado no rebanho bovino gaúcho. Medidas de prevenção e controle devem ser adotadas com urgência para impedir a progressão da infecção.

Sera samples of 7956 dairy catlle were tested with the serum neutralization test for antibody prevalence against Bovine Herpesvirus Type 1 (BHV 1). The samples were collected in 99 counties of the Rio Grande do Sul State. The counties were grouped in 9 dairy regions as determined by the "Cooperativa Central Gaúcha de Leite" (CCGL). The antibody prevalence among the 7956 será samples studied was 18.8%. The results demonstrated a similar antibody prevalence among the dairy regions. However, two regions had significant differences. Region 7 represented by "Passo Fundo" county had a prevalence of 12% and region 9 represented by "Quaraí" with the highest prevalence with 49.5%. The sera samples were divided into four groups according to cattle age: cattle with less than two years of age, 2 to 4, more than 4 to 6, and older than 6 years age. The results showed that the prevalence increases gradually with age. The major difference was between group 1 and 2. The results also demonstrated that the infection is more frequent in cattle older than two years. There was no significant difference among antibody titers between the age groups. The major relevance of the study was the prevalence of 54.5% positive herds, that represents 371 positive from a total of 685 herds tested. Considering this prevalence, it is clear that the BHV 1 is disseminated among the dairy population of the State. Prevention and control methods should be adopted so the spread of the infection can be withhold.